HOB细胞系（人成骨细胞SV40永生化）

HOB-SV40细胞系是一种通过慢病毒转染技术引入SV40大T抗原基因，从而实现原代人成骨细胞永生化的细胞系。HOB细胞系来源于正常人关节骨组织的原代成骨细胞，通过基因转染，SV40大T抗原基因被整合到细胞中，干扰了细胞周期调控机制，通过与关键的生长抑制基因p53和pRB相互作用，抑制其功能，使细胞获得了持续增殖的能力。

HOB-SV40永生化细胞系特性特征

永生化过程：通过慢病毒转染技术引入SV40大T抗原基因，SV40大T抗原通过与细胞生长抑制基因p53和pRB结合，抑制其功能，使细胞获得无限增殖能力。
细胞形态：HOB-SV40细胞呈长梭状，具有成纤维细胞样的形态，适合贴壁生长。
生长特性：在适宜的培养条件下，HOB-SV40细胞能够稳定传代20代以上，表现出良好的增殖能力和生长状态。
基因表达：HOB-SV40细胞系能够表达多种成骨相关基因，包括但不限于碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和骨形态发生蛋白（BMP），这些基因在成骨细胞的生物学功能中起着重要作用。
细胞周期调控：由于SV40大T抗原的表达，HOB-SV40细胞在细胞周期调控方面表现出异常，能够持续增殖而不受到正常细胞生长抑制机制的限制。

HOB细胞系参数表

细胞名称	HOB细胞系（人成骨细胞SV40永生化）
细胞别称	HOB(SV40)
来源	正常人颅骨中的原代成骨细胞
细胞形态	成纤维细胞样
细胞类型	贴壁细胞
安全等级	2
致瘤性	否
培养条件	成骨细胞培养体系
培养环境	37℃，5% CO₂，饱和湿度
细胞简介	HOB-SV40细胞是通过原代人成骨细胞经过慢病毒转染的方式携带SV40基因而建立的永生化细胞，合适条件下至少可以稳定传代20代以上。
换液周期	2-3天
培养基体积	T25瓶：10-12ml；10cm皿：12-15ml
传代比例	1:2 - 1:4
注意事项	控制消化时间，轻柔处理细胞，避免气泡影响细胞状态。
冻存规格	200-300万/ml，1ml每管
支原体检测	无
细胞代数	可稳定传代20代以上
应用领域	骨生物学研究、药物筛选、骨组织工程
细胞密度	80%-90%时进行传代
培养基	成纤维细胞专用培养基
培养湿度	70%-80%
冻存条件	冻存液：55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO 温度：液氮

培养教程

HOB人成骨细胞SV40永生化培养教程

HOB细胞复苏

将冻存的HOB细胞在37℃水浴中快速解冻，期间轻轻摇晃冻存管以加速解冻过程，通常1-2分钟即可。
解冻后，迅速将HOB细胞悬液转移至含有4-6ml预热好的完全培养基的离心管中，轻轻混匀。
在1000rpm下离心3-5分钟，弃去上清液。
加入适量的新鲜完全培养基（5-10ml），轻轻重悬HOB细胞，避免产生气泡。
将重悬后的HOB细胞转移至T25培养瓶中，补充完全培养基至10-12ml。
将培养瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。

HOB细胞传代操作

当HOB细胞覆盖培养瓶底面积的80%-90%时，应进行传代操作。
去除培养基：用移液管吸干培养瓶中的旧培养基。
润洗HOB细胞：加入3-4ml常温PBS轻轻润洗细胞，约10-20秒后吸尽PBS。
消化HOB细胞：加入1ml 0.25%胰酶溶液覆盖HOB细胞层，轻轻晃动培养瓶以确保胰酶均匀分布。
观察消化：将培养瓶放回培养箱中消化1-3分钟，观察HOB细胞变圆但未完全脱落时，立即加入2-3ml完全培养基终止消化。
离心：混匀后以900rpm离心3-5分钟，弃去上清液。
重悬HOB细胞：加入新鲜完全培养基轻轻重悬HOB细胞，并按照1:2至1:4的比例分配到新的培养瓶中。
静置培养：补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱中继续培养。

HOB细胞培养注意事项

消化时间控制：不同品牌的胰酶对HOB细胞的消化时间可能有所不同，建议严格控制消化时间，以避免HOB细胞受损。
操作轻柔：在传代和重悬HOB细胞时，尽量保持轻柔，避免产生气泡，这有助于维持HOB细胞的健康状态。
HOB细胞状态监控：定期检查HOB细胞的形态和生长状态，以确保细胞处于良好状态。
冻存后的HOB细胞应尽快取出一管进行复苏，以验证冻存效果。如果发现HOB细胞存活率较低，应及时调整冻存和复苏条件。

HOB细胞冻存

推荐使用92% FBS + 8% DMSO的冻存液配方。对于更有经验的研究人员，可以使用92%完全培养基 + 8% DMSO的配方。
消化HOB细胞并离心后，加入预先配置好的冻存液重悬HOB细胞。
将HOB细胞悬液分装到标记好的冻存管中。
将冻存管放入程序降温盒中，置于-80℃冰箱过夜，随后转移到液氮中长期保存。