U2OS (U-2 OS) 细胞系是一种源自人类骨肉瘤的细胞系，具有上皮样细胞形态。U2OS细胞最早于1964年由瑞典研究人员Pontén和Saksela从一名15岁白人女性患者的胫骨中分离，患者患有中度分化的原发性骨肉瘤。U2OS细胞广泛应用于肿瘤生物学、细胞生物学及药物筛选等多个研究领域。

U2OS细胞表现出高度的染色体结构变化，染色体数目通常在超三倍体范围内。U2OS细胞中几乎没有发现正常染色体，但大量稳定的标记染色体可以被鉴定出来，可以看到涉及相同染色体（特别是N1、N7、N9和N11）的不同染色体重排。共发现22个标记染色体，例如t(9qter→9q21::1p36→1p::？)、7p+、iso(17q)、t(15q;？)、4q+、del(3)(q21)、5q异常等。

U2OS细胞系曾于1972年进行检测，并成功消除支原体污染。

U2OS细胞特性特征

• 抗原表达：A型血，Rh+，以及多种HLA抗原（HLA A2、Aw30、B12、Bw35、B40）。

• 基因表达：表达骨肉瘤衍生生长因子（ODGF）和胰岛素样生长因子I（IGF-I）及II（IGF-II）。

• 同工酶特征：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；PGM1，2；PGM3，1；

• 在与WI-38细胞共培养及使用补体结合试验（CF法）检测猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒时，均未发现病毒感染。

U2OS细胞参数表

U2OS人骨肉瘤细胞培养教程

U2OS细胞复苏

• 解冻：将冻存的U2OS细胞悬液在37°C水浴中快速解冻，避免U2OS细胞受损。

• 离心：将解冻的U2OS细胞悬液移至离心管中，加入4-6mL完全培养基，1000rpm离心3-5分钟，去除冷冻保护剂。

• 重悬：弃去上清后，用完全培养基重悬U2OS细胞。

• 接种：将U2OS细胞悬液接种到含有6-8mL完全培养基的培养瓶中，并在37°C培养箱中过夜培养，以恢复U2OS细胞的活力。

U2OS细胞常规传代

• 更换培养基：用新鲜的完全培养基替换旧的培养基，以提供U2OS细胞新的营养物质。

• 细胞消化：使用预热的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，在37°C作用5-10分钟，使U2OS细胞从培养瓶底部分离。

• 终止消化：加入等量的完全培养基中和胰酶的作用，保护U2OS细胞不受胰酶损伤。

• 离心：1000rpm离心5分钟，去除消化过程中产生的废液，确保U2OS细胞的完整性。

• 细胞重悬：用完全培养基重悬U2OS细胞，并按1:2至1:4的比例接种到新的培养瓶中进行继续培养。

U2OS细胞冻存

• 收集细胞：在U2OS细胞处于对数生长期时进行收集，1000rpm离心5分钟以去除培养基。

• 冻存：用冻存液重悬U2OS细胞，并将其分装至冻存管中。

• 冷冻过程：将冻存管先置于-80°C冰箱中过夜，随后转入液氮中长期保存，确保U2OS细胞的活性。