KB细胞（人口腔表皮样癌细胞系）是一种具有上皮样形态的细胞，最初于1955年由哈里·伊格尔（Harry Eagle）从一位30岁男性口腔鳞状细胞癌患者的肿瘤组织中分离。尽管KB细胞最初被认为是口腔癌细胞，后续通过同工酶分析、HeLa染色体标记和DNA指纹图谱分析发现，KB细胞实际上是受HeLa细胞污染的衍生物。尽管其被确认受到HeLa细胞污染，KB细胞仍然因其独特的特性广泛应用于口腔癌研究，特别是在免疫组织化学和药物敏感性研究中，继续作为上皮细胞和肿瘤研究的重要实验模型。

KB细胞表现出上皮样贴壁生长特性，在免疫过氧化物酶染色中角蛋白呈阳性。

KB细胞特性特征

• 基因表达：KB细胞表达角蛋白，这是一种上皮细胞特有的结构蛋白，通常用于鉴定上皮来源的细胞。

• 同工酶分析：KB细胞显示出G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）和A同工酶的活性，这些同工酶在细胞代谢和抗氧化反应中起重要作用。

• DNA指纹图谱：在STR（短串联重复序列）分析中，KB细胞表现出特定的DNA型谱，包括不同的基因座位，如D5S818、D13S317等，这些特征可用于鉴定和确认其身份。

• 污染历史：KB细胞系被发现是通过HeLa细胞污染建立的，导致其DNA特征与HeLa细胞相似。

• 人乳头瘤病毒（HPV）：KB细胞中含有人乳头瘤病毒18型（HPV-18）的序列，这一发现进一步支持了其与肿瘤相关的特性，并表明其可能在肿瘤发生中发挥作用

KB细胞参数表

KB人口腔表皮样癌细胞培养教程

KB细胞细胞复苏与初代培养

• 将冻存的KB细胞从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中，并轻轻摇动冻存管使KB细胞均匀融化（约需1分钟）。避免KB细胞长时间在水浴中停留，以防KB细胞活力受损。

• 在超净工作台中，缓慢将融化的KB细胞悬液转移至15ml离心管，加入10ml已预温至37℃的完全培养基（90% MEM + 10% FBS），1000rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用2ml完全培养基轻轻重悬KB细胞沉淀，将悬浮的KB细胞接种于一个预先涂有胶原的T25培养瓶中。加入培养基至5ml，轻轻摇匀。

• 将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。24小时后更换培养基以去除未贴壁的浮游KB细胞，确保贴壁的KB细胞继续生长。

KB细胞传代培养

• 当KB细胞生长至80-90%汇合度时，吸去旧培养基，用PBS轻轻洗涤KB细胞一次以去除残留的培养基。

• 加入1ml 0.25%的胰酶溶液，置于37℃下消化1-2分钟，直至KB细胞出现皱缩、圆化并轻松脱落。

• 加入1ml完全培养基终止消化，轻轻吹打，使KB细胞充分分散成单细胞悬液。

• 将KB细胞悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清。随后用完全培养基重悬KB细胞。

• 根据需要以1:2至1:4的比例将KB细胞重新接种至新的T25培养瓶中，每瓶加入5ml完全培养基。置于37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，确保KB细胞良好生长。

• 每2-3天更换培养基一次，及时观察KB细胞形态和汇合度，确保KB细胞处于健康状态。

KB细胞冻存

• 收集对数期KB细胞：在KB细胞生长至对数生长期时，进行消化并收集KB细胞。用PBS清洗一次，去除培养基中的残留物。

• 制备KB细胞冻存液：用预冷的冻存液（90% FBS + 10% DMSO）以1×10⁶ KB细胞/ml的密度重悬细胞。

• KB细胞冻存操作：将重悬后的KB细胞分装入冻存管中，每管1ml。随后，放入-80℃程序降温盒中过夜进行缓慢冷冻。

• KB细胞长期保存：次日将KB细胞冻存管转移至液氮罐中，进行长期保存，避免温度波动对KB细胞活性的影响。