HEP-2细胞（Human Epithelioma-2）最初被认为来源于一名30岁女性的喉部鳞状细胞癌，于1952年首次建立。然而，后续研究表明，HEp-2细胞的实际来源并非最初所认为的喉癌，而是由于HeLa细胞的污染所致。

1968年，遗传学家Stanley Gartler首次通过同工酶分析、HeLa标记染色体及DNA指纹分析，发现HEp-2细胞实际上是被HeLa细胞污染的。

尽管HEP-2细胞被确认为HeLa细胞污染的产物，它仍然被广泛用于研究，尤其是在病毒学和免疫学领域。HEP-2细胞偶尔会出现多倍体，具有几个标记染色体和频繁的分钟染色体，这些特征与HeLa细胞密切相关。

尽管污染问题已得到证实，但许多研究仍然将HEP-2细胞误认为是来源于喉部鳞状细胞癌，并在相关文献中继续引用这一错误。

HEP-2细胞特性特征

• 细胞代数：通常在10代以内使用。

• 染色体特征：HEP-2细胞的染色体数目通常在69到73之间，偶尔出现多倍体，且观察到多个标记染色体和频繁的微小染色体。

• HeLa标记染色体：HEP-2细胞中包含一个M2拷贝、两个M3拷贝和一个M4拷贝，这些特征通过G-带模式得到确认。

• 基因表达：HEP-2细胞在角蛋白免疫过氧化物酶染色中呈阳性，表明其表达角蛋白，显示出上皮细胞的特性。

• 同功酶：HEP-2细胞表达G6PD和A同功酶。

• HEP-2细胞对多种病毒具有易感性，包括：人腺病毒3、人脊髓灰质炎病毒1、水疱性口炎病毒

HEP-2细胞参数表

HEP-2人喉表皮样癌细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮罐中取出冻存的HEP-2细胞冻存管，迅速放入37℃的水浴中，轻轻摇晃直至HEP-2细胞完全融化。

• 将融化后的HEP-2细胞悬液迅速转移至含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，缓慢加入培养基以稀释DMSO。

• 以1000rpm离心5分钟，弃去上清液，加入预温的完全培养基重悬HEP-2细胞。

• 将HEP-2细胞悬液接种于T25培养瓶中，置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

细胞传代

• 当HEP-2细胞在培养瓶中生长至70-80%融合时，弃去培养基，用PBS缓慢洗涤HEP-2细胞2次。

• 加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37℃培养箱中消化5-10分钟，直至HEP-2细胞变圆并轻松脱离瓶壁。

• 加入含血清的培养基终止消化过程，将HEP-2细胞悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

• 弃去上清液，用预温的完全培养基重悬HEP-2细胞，并轻轻吹打均匀。

• 按1:3的比例将HEP-2细胞悬液接种至新的培养瓶中，置于培养箱中继续培养。

细胞计数

• 取0.5ml HEp-2细胞悬液，加入等量的0.4%台盼蓝染液，混匀。

• 吸取染色后的HEP-2细胞悬液至血球计数板中，在显微镜下计数细胞数目。

• 分别计算未染色的活HEP-2细胞数和染色的死细胞数。

• 计算活细胞率：活HEP-2细胞数/总细胞数×100%。

细胞冻存

• 收集对数生长期的HEP-2细胞，以1000rpm离心5分钟收集细胞。

• 弃去上清液，加入预冷的冻存液（10% DMSO、20% FBS、70% DMEM）重悬HEP-2细胞，将细胞密度调整为1-2×10^6/ml。

• 将重悬后的HEP-2细胞分装入冻存管中，置于-80℃冰箱中过夜冻存。

• 次日，将冻存管转移至液氮罐中长期保存。