NPC/HK-1人鼻咽癌细胞系是从一位58岁中国男性鼻咽鳞状细胞癌患者的复发性肿瘤组织中分离。患者在接受放射治疗后，经历了长达17年半的病情缓解期，随后出现复发。这一细胞系由中南大学基础医学院的研究团队成功建立，并经过多次传代，目前已传代72次。

NPCHK-1细胞系的形态呈上皮样，具有典型的贴壁生长特征。核型分析显示NPCHK1细胞系为非整倍体，染色体数为74，并存在数量和结构上的畸变。

NPCHK1细胞特性特征

• 病毒状态: NPC/HK-1细胞系被认为是EB病毒阴性，未检测到Epstein-Barr病毒核抗原（EBNA）。

• 细胞标记物: NPCHK1细胞系在多项研究中显示出特定的肿瘤标记物表达，尤其是在与鼻咽癌相关的信号通路中，表现出较高的AXL蛋白表达，这与细胞的增殖、迁移和侵袭能力密切相关。

• 肿瘤形成: 在移植到裸鼠（BALB/c nu/nu）背部后，NPC/HK-1能够形成与患者原始肿瘤相似的肿瘤组织，组织学检查显示为分化良好的鳞状细胞癌。

NPCHK1细胞参数表

NPC/HK1人鼻咽癌细胞培养教程

传代方法

• 轻轻吸除T25培养瓶中的旧培养基，以防NPCHK1细胞长时间暴露在废弃培养基中。

• 加入3-4 ml的温PBS，轻轻冲洗NPCHK1细胞10-20秒，随后吸除PBS。

• 加入约1 ml胰酶，轻轻晃动培养瓶，使胰酶均匀覆盖NPCHK1细胞层。

• 将培养瓶放置于37°C培养箱中，进行NPCHK1细胞的消化处理。

• 当NPCHK1细胞间隙变大但尚未完全脱落时，加入2-3 ml完全培养基以终止消化。

• 轻柔吹打混匀NPCHK1细胞，900 rpm离心3-5分钟，弃去上清。

• 用新鲜的完全培养基重悬NPCHK1细胞，并均匀接种到新培养瓶中。

• 补充新鲜的培养基，将NPCHK1细胞放回培养箱中静置培养。

注意事项

• 控制胰酶消化时间，避免过度消化以防止NPCHK1细胞损伤。

• 吹打NPCHK1细胞时要轻柔，避免产生气泡，这可能会影响NPCHK1细胞的健康。

• 每2-3天更换一次培养基，确保NPCHK1细胞获得足够的营养。

冻存方法

• 冻存液配方: 60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO

• 冻存规格: 每管冻存NPCHK1细胞数为200-300万细胞/ml，每管1 ml

• 按上述传代方法消化NPCHK1细胞，并通过离心获得NPCHK1细胞沉淀。

• 将NPCHK1细胞沉淀轻轻重悬于预配好的冻存液中。

• 将NPCHK1细胞悬液迅速转移至标记好的冻存管中。

• 将冻存管置于程序冻存盒中，放入-80°C冰箱中过夜，次日转移至液氮中长期保存。

• 如果缺乏程序冻存设备，可将冻存管先置于4°C静置5-10分钟，再在-20°C静置2小时，最后转入-80°C冰箱中过夜。

复苏与培养

• 从液氮中迅速取出NPCHK1细胞冻存管，在37°C水浴中解冻，轻轻摇晃直至冰块完全融化。

• 将NPCHK1细胞悬液转移至15 ml离心管，加入9 ml培养基。

• 900 rpm离心5分钟，弃去上清，用5 ml培养基重悬NPCHK1细胞。

• 将NPCHK1细胞悬液接种至T25培养瓶中，放入培养箱中培养。

• 次日更换培养基，去除未贴壁的死细胞和残余的DMSO。

• 当NPCHK1细胞贴壁并稳定生长后，根据NPCHK1细胞的生长情况进行传代。