C666-1细胞是C666细胞系的一个亚克隆，起源于中国南方的鼻咽癌异种移植物。C666-1细胞以粘附生长为特征，表现出缺乏接触抑制的特性，并持续表达EBV编码的RNA和细胞角蛋白。

C666-1细胞表达EBV核抗原1（EBNA1）、潜伏膜蛋白1（LMP1）和潜伏膜蛋白2（LMP2）转录物，类似于EBV潜伏期II模式。该病毒EBV基因型为EBV-1，具有潜伏膜蛋白1基因羧基末端30bp的缺失。

C666-1细胞是亚二倍体，其染色体模式数为45。在鼻咽癌细胞系中，C666-1细胞独特地携带EBV，C666-1细胞在无胸腺裸小鼠中的致瘤性。

C666-1细胞特性

• C666-1细胞是C666细胞系的亚克隆，源自中国南方的NPC异种移植。

• C666-1细胞粘附生长，缺乏接触抑制。

• C666-1细胞持续表达EBV编码的RNA和细胞角蛋白阳性。

• C666-1细胞表达EBNA1蛋白、LMP1和LMP2转录物，类似于EBV潜伏期II模式。

• C666-1细胞的EBV基因型为EBV-1，其潜伏膜蛋白1基因存在30bp的羧基末端缺失。

• C666-1细胞是鼻咽癌细胞系中唯一携带EBV的。

• C666-1细胞在无胸腺裸小鼠中具有致瘤性。

C666-1细胞参数表

C666-1人鼻咽癌细胞系培养教程

细胞复苏

• 从-80℃冰箱中取出C6661细胞冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶。

• 将解冻后的C6661细胞悬液转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中。

• 在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清液，重悬C6661细胞用5ml完全培养基。

细胞传代

• 当C6661细胞密度达到80%-90%时，进行传代培养。

• 弃去培养瓶中上清液，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

• 加入1-2ml 0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 观察C6661细胞消化情况，大部分细胞变圆并脱落后，加入足量完全培养基终止消化。

• 轻轻吹打C6661细胞层，吸出悬液，离心5分钟后弃去上清液，补充1-2ml完全培养基后吹匀。

• 将C6661细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存

• C6661细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗C6661细胞一次。

• 加入1ml 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培养瓶中，观察C6661细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。

• 吹打C6661细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

• 弃上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液，混匀后分装入冻存管中。

• 将C6661细胞冻存管放入-80℃冰箱保存。