HCE-T细胞系是通过一位49岁女性的角膜组织进行SV40病毒转化建立，表现出典型的上皮细胞形态，且能够产生64kD角蛋白。HCE-T细胞通过应用SV40-Adeno载体的转化技术实现了永生化，在体外具有长期增殖能力。

HCE-T细胞特性特征

• 角蛋白表达：HCE-T细胞能够产生64kD的角蛋白。

• 细胞膜特性：研究表明HCE-T细胞对自然杀伤细胞具有高度敏感性，适合用作体外靶标。

• 基因特征：HCE-T细胞系的基因特征与角膜上皮细胞相关

• HCE-T细胞表达与角膜上皮细胞功能相关的基因，如角蛋白基因。

• 通过转化后的HCE-T细胞系具有一定的基因稳定性，使其在实验中表现出一致的生物学特性

HCE-T细胞参数表

HCE-T人角膜上皮细胞培养教程

细胞复苏

• 将水浴锅预热至37℃。

• 准备D/F12培养基，内含15%胎牛血清（FBS）及5μg/ml抗生素（如青霉素和链霉素），确保培养基适用于HCET细胞的复苏。

• 从液氮罐中取出冻存的HCET细胞，将其迅速置于37℃的水浴中，轻轻摇动冻存管，使HCET细胞在1-2分钟内完全解冻。

• 解冻后，立即将HCET细胞悬液转移至含有5ml预热好的培养基的离心管中，轻轻混匀。

• 以1000 rpm离心5分钟，去除冻存保护剂（如DMSO或甘油）。

• 将HCET细胞沉淀重悬于5-10ml新鲜培养基中，然后将细胞悬液转移至培养瓶中，置于培养箱内培养。

HCET细胞培养

• 将HCET细胞培养瓶放置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中。

• 每2-3天更换培养基，确保培养基新鲜，并适时观察HCET细胞的生长状况。

• HCET细胞应展现出典型的上皮细胞形态，贴壁生长良好。

• 当HCET细胞密度达到80%-90%时，应准备进行传代操作。

HCET细胞传代

• 用无菌PBS缓冲液轻柔洗涤HCET细胞，去除残余的旧培养基。

• 加入适量的胰酶（浓度为0.05%-0.25%），轻轻摇晃培养瓶以使HCET细胞从瓶壁脱落。

• 观察HCET细胞完全脱落后，立即加入培养基中和胰酶以终止消化作用。

• 将HCET细胞悬液以1000 rpm离心5分钟，去除胰酶。

• 将HCET细胞沉淀重悬于新鲜培养基中，按1:2至1:4的比例分种至新的培养瓶中，继续培养。

HCET细胞冻存

• 当HCET细胞密度达到80%-90%时，进行细胞冻存操作。

• 准备好冻存液，通常为含5%-15% DMSO或甘油的培养基。

• 将HCET细胞沉淀重悬于冻存液中，混匀后分装至冻存管内。

• 使用“慢冻快融”方法：以-1至-2℃/分钟的速度缓慢冷冻至-80℃，随后将冻存管转移至液氮中进行长期保存。

注意事项

• 在HCET细胞操作过程中，确保所有器材和试剂均已进行无菌处理，以避免细胞污染。

• HCET细胞生长过程中，应定期观察其形态和生长情况，如有异常及时调整培养条件。

• 详细记录每次传代、冻存的日期及HCET细胞状态，以便进行后续研究及追踪。