试剂盒适用范围：
本试剂盒用于生物制品中牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）的定量检测。仅用于研究和生产检测使用，不用于临床诊断。
试剂盒原理：
应用双抗体夹心免疫分析法，微孔板中预先包被有抗BSA单克隆抗体，和样品中的BSA， HRP标记的抗BSA检测抗体形成“包被抗体-BSA-酶标记抗体”夹心复合物，加入TMB底物液与HRP发生酶促反应，生成带颜色的反应产物，颜色深浅与样品中BSA含量成正比。使用酶标仪在特定波长下读取吸光值，对标准溶液浓度和吸光值进行线性回归拟合，得到回归方程，将样品的吸光值代入回归方程y值，求得x值，经样品稀释倍数校正，即可得出样品BSA的含量。
提供的试剂与材料：
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名称
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规格
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数量
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抗BSA单抗包被板
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96/48孔
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1块
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HRP标记抗体
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14/7 mL
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1瓶
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10X洗液（样品稀释液）
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200 mL
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1瓶
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BSA标准溶液
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1 mL
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1瓶/浓度
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BSA 内部参比
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1 mL
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1瓶
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TMB底物液
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6.5 mL
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1瓶
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终止液
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6.5 mL
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1瓶
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7#自封袋
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8/4 个
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1份
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说明书
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-
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1份
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BSA标准溶液浓度为0、2.5、5、10、20、40 ng/ mL BSA 内部参比浓度为30 ng/ mL
用户自备的设备与材料：
1. 酶标仪450 nm 和 630 nm
2. 25 ℃水浴锅或孵箱（室温低时可选配）
3. 微量移液器：单道50µL和100µL、多道300 µl
4. 带滤芯移液头
5. 2L样品瓶
6. 超纯水或注射用水
试剂盒性能：
1. 检测范围 2.5ng/ mL -40 ng/ mL，检测限 0.125ng/ml，定量限低于2.5ng/ml。
2. 标准溶液拟合回算浓度相对误差（%RE）可以达到±10%以内。
3. 决定系数 R2 大于 0.99。
4. 以其它来源 BSA为样品测试，准确度在±10%之内。
5. 批内批间精密度在±10%之内。
6. 与人血清白蛋白（HSA）无交叉反应，且无干扰现象。
试剂盒操作：
操作注意事项：
1. 每步孵育必须避光进行，同时使用提供的自封袋或者自备封板膜封板，避免孔内液体蒸发。
2. 移液器及枪头、稀释洗液用2L瓶应无BSA 污染，建议配备一套专用，实验室环境应无BSA 污染。
3. 使用移液器加液时，第一步加标准溶液和样品，移液头尖端应置于板孔内部加液，避免孔内液体溅出引起其它孔的污染，加其余步骤的液体时，移液头尖端应在板孔上方悬加，勿接触孔壁，避免引起孔间污染。
4. 加样时避免产生气泡，气泡会使反应结果偏低，如果有可以使用吸头轻轻戳破，注意每浓度要更换吸头。
5. 吸液时最大吸液量要低于滤芯位置，避免吸取液体接触滤芯带来污染。
6. 未使用完的试剂盒组分放回2-8℃保存，包被板放回包装袋内并且用自封袋封口。
7. 样品应不含叠氮化钠(NaN3)，会抑制HRP的活性。如需使用，预先进行溶液置换。
操作准备：
1. 将试剂盒中所有试剂及包被板取出至实验桌面回温30分钟。
2. 稀释10X 洗液（样品稀释液），稀释前摇匀，观察如有结晶，在不超过 37℃水浴中溶解，用 1800 毫升超纯水或注射用水稀释至工作浓度。
3. 样品准备，预估样品浓度，若高于试剂盒中 BSA 标准溶液最高浓度，使用工作浓度的样品稀释液稀释至检测范围内，或者购买我公司高浓度牛血清白蛋白定量检测试剂盒，货号Bt0123-1812。若样品浓度在试剂盒检测范围内，需使用工作浓度的样品稀释液对样品进行2倍稀释，至少进行2个稀释度测定。
操作步骤：
1. 取出实验所需量包被板条，余下板条按要求封装尽快放回2-8℃。加入 BSA 标准溶液、内部参比和待测样
品，50 µL/孔，每浓度重复加2～3 孔，自封袋或封板膜封板，避光孵育1小时，孵育温度20～37℃均可达到实验效果，建议固定孵育温度25℃。
2. 反应完成后洗板，小心取出实验板，甩掉孔内液体，在吸水纸上轻拍五六次，使用多道移液器每孔加 300-350
微升工作浓度的洗液，加液时移液器头尖端应在板孔上方，勿接触到板孔，少量吸取洗液，勿接触到移液头的滤芯，甩掉洗液，在吸水纸上轻拍五六次。按此法洗板 3 次。如使用洗板机洗板，谨慎操作，避免造成孔间污染。
3. 每孔加入 100 µL HRP 标记抗体，自封袋或封板膜封板，避光孵育 30 分钟，孵育温度20～30℃均可达到实验效果，建议固定孵育温度25℃。
4. 反应完成后，按步骤2方式洗板。
5. 每孔加入 50 µL TMB 底物液，自封袋或封板膜封板，避光孵育15分钟，孵育温度20～30℃均可达到实验效果，建议固定孵育温度25℃。
6. 反应完成后，每孔加入 50 µL 终止液，注意与加入 TMB底物液保持相同的加液速度。
7. 酶标仪设置检测波长 450nm 和参考波长630nm 读取OD值，如无 630nm 滤光片也可以使用单波长 450nm 。
建议使用双波长。检测在反应终止后 30 分钟内完成。
数据分析：
1. 对标准溶液和样品每浓度的重复孔OD值求取平均值、标准偏差、%CV，标准溶液和样品%CV需≤15%（小于2.5ng/ml的样品可不做要求），对于明显偏离的结果予以舍弃。见示例图1。
2. 建立标准曲线，使用EXCEL或者其它合适应用程序，对标准溶液浓度和对应的平均OD值进行线性回归拟合，
得到标准曲线、回归方程及决定系数R2，见示例图2。决定系数R2需大于0.99， 内部参比（30 ng/mL）计算值在 30±4.5 ng/mL 范围内。如决定系数R2低于0.99,为了使计算结果更准确，可使用四参数拟合， 如有需要，具体拟合方法可以咨询我公司售后。
3. 使用回归方程计算样品浓度，y为OD值，x为浓度，将样品平均OD值代入回归方程，求浓度x值，如果样品经过稀释，乘以稀释倍数即为该样品BSA含量值。
4. 样品取值，对于超出试剂盒检测范围的高浓度样品，取在试剂盒检测范围内的最低稀释倍数的含量值，对于在试剂盒检测范围内的样品，取2倍稀释的含量值。样品计算结果≤0ng/ml时，可以记录为小于检测限。
 
示例图1 示例图2
储存条件及效期：
2-8℃保存，勿冻存，有效期一年。
订购及技术支持：
地 址：江苏省无锡市新吴区菱湖大道 97-1 兴业楼C411
订 购：18601586117
技 术：18115767613
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